荧光免疫层析技术

荧光免疫层析技术原理与胶体金免疫层析技术原理大致相同，区别在于胶体金免疫层析技术以胶体金为显色媒介，可通过肉眼直接判定结果；而荧光免疫层析则以荧光物质为标记物，通过检测激光激发的荧光，实现对试纸条/卡上单个或多个目标物的定性或定量分析。

常用的荧光物质主要有有机分子染料、半导体量子点、稀土离子螯合物等。

1、荧光素及其衍生物

（1）异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）：黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。相对分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495 nm，最大发射光波长520～530 nm，呈现明亮的黄绿色荧光。有两种同分异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。

（2）四乙基罗丹明（rhodamine，RIB200）：橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570 nm，最大发射光波长为595～600 nm，呈橘红色荧光。

（3）四甲基异硫氰酸罗丹明（tetramethylrhodamine isothiocyanate，TRITC）：最大吸引光波长为550 nm，最大发射光波长为620 nm，呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。

（4）藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）：一种可进行光合作用的自然荧光素，最大吸收峰：564 nm，荧光呈红色，易与抗体、生物素、亲合素、免疫蛋白等物质结合。

2、量子点  量子点（quantum dots，QDs）　是一种新型的无机荧光染料，近年来其在生物标记方面备受研究者关注，随着半导体量子点合成的进展，可用于生物标记的核壳结构如dSe/ZnS、CdTe/ZnS等。与传统的有机荧光染料相比，QDs 拥有独特的光电性质，荧光量子产率高，荧光寿命长，抗光漂白性强，激发光谱宽，可用于多组分分子的同时检测等优点，在生物医学标记和光学成像方面起着越来越重要的作用。近年来，功能化的量子点亦作为荧光探针用于生物识别过程及生物检测，经量子点标记的蛋白质毒素抗体可以实现对蛋白的荧光免疫分析。

3、稀土离子螯合物  镧系螯合物中某些3价稀土镧系元素，如铕（Eu3+）、铈（Ce3+）、铽（Tb3+）等的螯合物在经过激发后可以发射特征性的荧光，且激发光的波长范围宽，发射光的波长范围窄，荧光需要的衰变时间长，在分辨荧光免疫测定中最适用，其中以Eu3+应用最广。但这类荧光标记对环境比较敏感，导致其荧光容易被作为溶剂的水分子等所猝灭。