造血干细胞检测 （Hematopoietic stem cell detection）

CD34+CD38-：造血干细胞；

CD34+CD38+：造血祖细胞。

造血干细胞（hematopoietic sten cell， HSC）是干细胞的一种，是其有高度自我更新能力和多项分化潜能的造血前体细胞。正靠情况下，造血干细胞经过不对称性有丝分裂形成两个子代细胞，其中一个仍然维持造血干细胞的全部特征，即自我更新，自我更新使得干细胞的数量和质量维持不变；另一个子代细胞分化产生各系造血祖细胞，从面维持造血组织的功能和血细胞数量的恒定。成年人血液造血干细胞主要存在于骨髓，约占骨髓细胞的0.05%。

造血干细胞在分化为形态上可识别的幼稚血细胞之前，还经历了一个发育的中间阶段，即造血祖细胞（progenitor cell）阶段。干细胞是祖细胞的来源，是祖细胞的前体细胞。造血干细胞和造血祖细泡的主要区别在于：造血干细胞有自我更新和自我维持力，但不能扩增。在体内的数量维持恒定；造血粗胞则有高度扩增能力，部分（早期）甚至全部（晚期）丧失自我更新和自我维持力。早期仍具有分化能力的祖细胞称为多向性祖细胞，晚期只能向特定系列分化的祖细胞称为定向祖细胞。定向祖细胞根据其分化方向又可分为红系粗细胞、粒-巨噬系祖细胞、巨核系祖细胞和淋系祖细胞。

最初人们以为CD34⁺细胞全是造血干细胞，但多年来大量实验数据证实：CD34⁺细胞是一群异质性细胞，其中98%以上是早期和晚期的造血祖细胞，而造血干细胞仅仅占CD34⁺细胞2%以下。所以，CD34⁺被公认为造血干、祖细胞的共同标志。CD34⁺细胞的检测，在临床上对于有剂量要求的干细胞移植而言，显然十分重要。目前认为：人的造血干细胞表达CD34、KDR、CD117、AC133、CD90(Thy-1)、CD123(IL-3Ra链)和CD135(FLK2/FLT-3)，不表达CD33、CD38，CD71、HLA-DR和Lin，人的lin标记主要包括CD3、CD19、CD20、CD16、

CD56、CD14、CD11b、CD5、 Glycophorin A等分化抗原。与造血干细胞不同，造血祖细胞表达CD38和 HLA-DR，并逐步开始出现系列相关标志。因此，以CD45作为有核细胞的标志，联合运用CD34和CD38单抗，通过流式细胞术即可进行造血干细胞和造血祖细胞的分类检测。一般来说，CD34⁺CD38^-细胞代表造血干细胞，CD34⁺CD38⁺细胞代表造血祖细胞。

在CD34计数检测中有众多因素影响着计数的准确性，这些因素可以通过以下方面减少或去除影响：

1、标本准备：标本为静脉血、骨髓、脐带血、外周血。抗凝剂可选择EDTA或肝素。标本要求：①标本量1ml；②标本应在采集后6小时内处理，不能及时处理的，放4℃，12小时内处理；③样本白细胞计数应在4-10×10⁶/ml之间。若＞10×10⁶/ml样本需要用PBS稀释；若＜4×10⁶/ml，应分离PBMC或加大样本量。

2、溶血素时间：选择合适的溶血素溶血后1小时内采集分析。

3、CD34抗体的选择：使用Ⅲ类位点特异性抗体能最大限度地提高检测的敏感度。

参考文献：吴长有.2014.流式细胞术的基础和临床应用.北京：人民卫生出版社。

流式细胞术（流式细胞仪）。