B淋巴细胞表面标志的检测

B淋巴细胞：8～15%。

1、成熟的B细胞经外周血迁出，受抗原刺激后分化增殖为浆细胞，合成和分泌抗体，主要执行机体的体液免疫。B细胞的表面标志主要为膜免疫球蛋白或表面免疫球蛋白(membrane immunoglobulin或surface immunoglobulin， mIg或 sIg) IgM和IgD，以及CD抗原CD19、CD20、CD22。 B细胞表面有CD19、CD20、CD21 (CR2)、CD22和 CD23等分化抗原，其中有些系全体B细胞所共有，而有些仅为活化B细胞所特有。据此可采用针对相应抗原的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化法或流式细胞计数对外周血B细胞进行检测。健康成人外周血CD19、CD20阳性B淋巴细胞占淋巴细胞总数的8%～15%。B细胞表面有膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体，其中以SmIg为B 细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。

2、外周成熟B淋巴细胞分为B1细胞和B2细胞两个亚群，B2细胞主要是外周成熟的常规检测的B细胞，是执行体液免疫的主要细胞，B1细胞与机体的免疫调节、自身免疫病及B细胞源性肿瘤密切相关；对B细胞及亚群的检测是研究自身免疫性疾病及疾病中免疫调节紊乱的重要指标。

3、B淋巴细胞百分数可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病：B淋巴细胞上升多见于：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤、艾滋病；B淋巴细胞下降多见于：原发性免疫缺陷病，如性联无丙种球蛋白血症等、恶性肿瘤；T淋巴细胞与B淋巴细胞同时下降多见于：联合免疫缺陷病，如重症联合免疫缺陷病等。

4、B淋巴细胞表面标志的检测在临床上可以对淋巴细胞白血病进行分型：用于白血病细胞免疫表型分析，在某些白血病如B系急性淋巴细胞性白血病CD19、CD20、CD24阳性表达；慢性淋巴细胞白血病细胞多表达CD5，CD19、CD20；毛细胞性白血病患者CD19、CD20、CD22呈阳性。B细胞慢性淋巴细胞白血病患者的EAC、SmIg、小鼠红细胞花环阳性率明显上升。

5、某些疾病时T、B细胞数量和比例发生改变：传染性单核细胞增多症初期B细胞比例可以升高，以后下降。先天性胸腺发育不良的患者，外周血淋巴细胞水平一般正常，但SmIg阳性细胞比例异常增多。

1、SmIg检测时，染色后观察时间不能超过30min，或在染色时加叠氮钠防止帽状物形成或被吞饮。

2、对荧光素标记抗体用量应做预试验，找到最佳抗体使用浓度。

3、每份样品检测的同时必须设置同型对照， 即用荧光素标记的正常小鼠Ig (Ig亚类与荧光抗体相同)与荧光素标记的抗CD单抗同时检测。在分析待测血样结果时应减去同型对照的阳性结果，或以同型对照管为阴性管。

4、有生物危害的标本在样品处理时应在生物安全柜内进行，上样前要用固定剂灭活危害因子或采用物理防护手段。

5、试剂的参考值(区间) 受被检测者性别、年龄及样本制备技术的影响，此外，种族和抗原决定基表达的个体差异也可以影响参考值( 区间)，但是并没有足够的数据来建立此模型。正常参考区间的决定建立在性别、年龄、临床表现和种族的情况都应了解的前提下，且参考区间仅仅是作为一种信息提供的，因此由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值( 区间)。

SmIg的检测法、Fc受体和补体受体的检测法、小鼠红细胞受体的检测法、流式细胞术检测法。

1、SmIg的检测：采用间接荧光免疫法或包括ABC法在内的酶免疫组化法，关键是选用高效价、高特异性和高亲和力的荧光或酶标记的多价抗人Ig抗体，也可分别用各种类型的Ig，即IgM、IgG、 IgA、IgE等抗血清，检测带有各种类型Ig的B细胞，在人外周血中以带有SmIgM的细胞数为最多。B细胞经荧光标记的抗Ig抗体染色，细胞膜表团呈现的荧光着色可有不同的形式，开始均匀分布呈环状，其后集中在某些部位呈斑点状，然后又可集在某一部位呈帽状，最后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。这一现象是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下，膜呈半液体状，而镶嵌物能在其中移动。当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原与抗体结合物可连成斑点和帽状，时间过长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失。

2、Fc受体和补体受体的检测：B细胞表面具有与IgG Fc段结合的受体，极易与抗原抗体复合物中抗体Fc段牢固结合，故用相应抗体致敏的红细胞(EA)作指示物，在一定条件下，它能与带Fc受体的B细胞形成EA花环，故称EA花环试验。而细胞表面的补体受体，则能与红细胞(E)-抗红细胞抗体(A)-补体(C)复合物(EAC)中的补体相结合，从而建立EAC花环试验。但由于单核细胞、巨噬细胞、NK以及部分T细胞也带有Fc或补体受体。因此形成EA和EAC花环并非B细胞所特有，加上该类试验需制备新鲜指示物，操作麻烦，基本上已被其他试验所取代，甚少应用。

3、小鼠红细胞受体的检测：部分B细胞能与小鼠红细胞形成花环，慢性B细胞白血病外周血淋巴细胞形成小鼠红细胞花环率高达60%～85%，但健康人该花环率仅占总淋巴细胞的5%～10%，据此推知形成该花环的性能是某些B细胞亚群的标志，由于方法简便，临床可用作鉴定不同型淋巴细胞白血病。

4、流式细胞术检测B细胞亚群：采用多参数标记的单克隆荧光抗体标记单个核细胞悬液，根据B细胞的表面标志，将外周血单个核细胞悬液经计数后，加入经FITC标记的CD19与PE标记的CD5单克隆抗体，然后在流式细胞仪上进行计数检测，可准确获得外周血中B淋巴细胞总数及B1、B2细胞亚群的表达。在应用绝对计数管时，还可得到待测样本中的细胞浓度。一般CD3^- CD19⁺为B细胞。