自然杀伤细胞表面标志的检测

健康成年人外周血NK细胞占淋巴细胞总数的5%～15%。

1、自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是参与机体免疫应答反应特别是肿瘤免疫应答的重要免疫细胞。不仅与抗肿瘤和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫的发生。与T细胞、B细胞相比，NK细胞表面标志的特异性是相对的。人NK细胞mIg阴性，部分NK细胞CD2、CD3和CD8阳性，表达IL-2受体β链(P75，CD122)， CD11b/CD18阳性。NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原，但均非NK细胞所特有，目前常用检测NK细胞的标记有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1。目前临床检测中多以CD3^-、CD16⁺、 CD56⁺作为NK细胞的典型标志。

2、NK细胞最主要的功能特征：是对肿瘤细胞及其他靶细胞具有非特异的杀伤力，这种杀伤效应不依赖抗体与补体。体外检测NK细胞活性是了解NK细胞功能以及其与某些疾病关系的一个重要手段。

3、NK细胞增高：常见于某些病毒感染性疾病的早期；长期使用干扰素或使用干扰素的诱导物；骨髓移植后；习惯性流产。

4、NK细胞降低：常见于恶性肿瘤，特别是中晚期或伴有转移的肿瘤免疫缺陷病及使用肾上腺激素等免疫抑制药；部分病毒感染、细菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。

5、在某些白血病：如NK细胞白血病细胞 80%～90% CD16阳性，95%CD56阳性。

1、对荧光素标记抗体用量应做预试验，找到最佳抗体使用浓度。

2、每份样品检测的同时必须设置同型对照， 即用荧光素标记的正常小鼠Ig (Ig亚类与荧光抗体相同〉与荧光素标记的抗CD单抗同时检测。在分析待测血样结果时应减去同型对照的阳性结果，或以同型对照管为阴性管。

3、有生物危害的标本在样品处理时应在生物安全柜内进行，上样前要用固定剂灭活危害因子或采用物理防护手段。

流式细胞分析法

目前临床上常采用多参数荧光标记的单克隆抗体标记NK细胞，在流式细胞仪上进行计数分析。采用多参数标记的单克隆荧光抗体标记单个核细胞悬液，根据NK细胞的表面标志，将外周血单个核细胞悬液经计数后，加入经FITC标记的CD3与PE标记的CD56和CD16单克隆抗体，然后在流式细胞仪上进行计数检测，可准确获得外周血中NK细胞占淋巴细胞的百分比。在应用绝对计数管时，还可得到待测样本中的细胞浓度。一般CD3^- CD16⁺ CD56⁺为NK细胞。由于流式细胞仪机型不同，能够同时检测的荧光染料数目不同，选择试剂及分析软件亦不尽相同。健康成年人外周血NK细胞占淋巴细胞总数的5%～15%。