柯萨奇病毒16型核酸扩增荧光检测（CA16-PCR） Coxsachie Virus 16 Nucleic Acid Amplification Detection

（1） 定性：参考区间：阴性；根据检测CT值（循环阈值）判断阴性/阳性结果。

（2） 定量：如为定量检测试剂盒，可根据定量试剂盒的要求进行操作，报定量结果。

手足口病是由肠道病毒引起的急性传染病，以柯萨奇A组16型和肠道病毒71型多见。多发生于学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高。主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹、少数重症病例可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，多由EV71感染引起，致死原因主要为重症脑干脑炎及神经源性肺水肿。

严格按照临床核酸扩增实验室的要求进行实验室管理。由于PCR方法敏感，要避免扩增前标本之间的交叉污染，也要避免扩增后产物的污染；同时要防止标本选择不当、采样错误、核酸的降解、丢失，扩增抑制物存在等因素对实验的影响。

1) 标本采集：由于标本的质量直接影响检测结果，所以要严格标本采集运送等过程。

咽拭子：采集病人发病3日内的咽拭子标本，用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部，然后迅速将棉签放入装有3-5ml保存液；疱疹液：可同时采集多个疱疹作为一份标本，先用75%的酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内装有3-5ml保存液；粪便：采集病人发病3日内的粪便标本，采集量5-8g/份，采集后立即放入无菌采便管（含维持液或生理盐水）内。全血：2mL静脉血，紫帽/黄帽采血管；避免溶血、严重脂血及交叉污染。

2) 标本保存及运输：采集后立即送检（<2h），如不能立即送检2～8℃存放<48 h。避免污染及核酸降解。

3) 注意事项：一次CA16核酸扩增结果阴性，并不能完全排除CA16感染，需要需要选择合适的标本类型，增加送检次数，避免标本被污染及核酸降解。阴性结果代表CA16核酸浓度不能检测到或者在预定的阈值之下，应结合临床信息综合判断。 

4) 干扰因素：有可能抑制核酸扩增的物质，如肝素，严重溶血等。

以反转录实时荧光PCR为主要技术。