肠道病毒71型核酸扩增荧光检测（EV71-PCR） Human Enterovirus 71 Nucleic Acid Amplification Detection

（1） 定性：参考区间：阴性；根据检测CT值（循环阈值）判断阴性/阳性结果。

（2） 定量：如为定量检测试剂盒，可根据定量试剂盒的要求进行操作，报定量结果。

肠道病毒71型是引起婴幼儿手足口病主要病原体之一，还可引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹等多种神经系统病变。手足口病和中枢神经系统感染是EV71感染而引起的两大常见临床症状。患者以4-5岁以下小儿多见，成人也可患病，但病情多较轻。潜伏期2-5日。传播途径不仅是粪-口传播，病毒主要通过人群间的密切接触进行传播。感染初期患者表现为低热、流涕、食欲下降、口痛、呕吐、腹泻等。口腔黏膜出现小疱疹，破溃后形成溃疡，同时皮肤可出现斑丘疹，以手足为多见。

严格按照临床核酸扩增实验室的要求进行实验室管理。由于PCR方法敏感，要避免扩增前标本之间的交叉污染，也要避免扩增后产物的污染；同时要防止标本选择不当、采样错误、核酸的降解、丢失，扩增抑制物存在等因素对实验的影响。

1) 标本采集：由于标本的质量直接影响检测结果，所以要严格标本采集运送等过程。

脑脊液：0.5ml脑脊液于灭菌的一次性试管中送检；鼻/咽拭子：用灭菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入灭菌试管，（含0.4ml灭菌生理盐水），密闭送检；疱疹分泌物：用漱口液或无菌捻拭子拭取鼻腔、咽部或疱疹分泌物，将分泌物或咽拭子置入灭菌试管，（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后密闭送检；粪便：用灭菌捻拭子拭取粪便或腹泻物置于无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），密闭送检。全血：2mL静脉血，紫帽/黄帽采血管；避免溶血、严重脂血及交叉污染。

2) 标本保存及运输：采集后立即送检（<2h），如不能立即送检2～8℃存放<48 h。避免污染及核酸降解。

3) 注意事项：一次EV71核酸扩增结果阴性，并不能完全排除EV71感染，需要增加送检次数，避免标本被污染及核酸降解。阴性结果代表EV71核酸浓度不能检测到或者在预定的阈值之下，应结合临床信息综合判断。 

4) 干扰因素：有可能抑制核酸扩增的物质，如肝素，严重溶血等。

以反转录实时荧光PCR为主要技术。