KRAS基因突变检测（KRAS） KRAS Targeted Mutation Analysis

（1）参考区间：野生型。

（2）可报告区间为：野生型/突变型。

KRAS基因是人体肿瘤中常见的致癌基因，该基因的体细胞突变常见于多种恶性肿瘤，在结直肠癌患者中突变率的为20-50%，在肺癌患者中为15-30%，。作为EGFR信号通路下游最重要的效应因子，KRAS在肿瘤信号转导中发挥重要作用。对KRAS基因突变的检测，可以为肿瘤患者的个性化治疗提供更确切的依据。与EGFR突变意义不同，KRAS 基因突变型患者对EGFR-TKI 药物治疗不敏感。中国卫生部颁布的《结直肠癌诊疗规范（2010年版）》中推荐西妥昔单抗用于治疗KRAS基因状态野生型患者。欧洲药监局和美国FDA明确规定了使用靶向药物西妥昔单抗和帕尼单抗治疗转移性结直肠癌必须先检测KRAS基因。

KRAS基因突变存在多种类型，最常见的是第12密码子突变，其中又以Gly12Asp突变率最高。尽管KRAS基因突变在上述肿瘤里面的比例较高，但是几乎并没有特别的靶向药可用，期待能尽快研发出有针对这些靶点的药物应用于患者的治疗。

严格按照临床核酸扩增实验室的要求进行实验室管理。由于PCR方法敏感，要避免扩增前标本之间的交叉污染，也要避免扩增后产物的污染；同时要防止标本选择不当、采样错误、核酸的降解、丢失，扩增抑制物存在等因素对实验的影响。

1) 标本采集：可使用经病理确诊后的癌组织的石蜡切片，同时送检HE染色切片。取样组织中应确定含有30%以上的肿瘤病变细胞，所取部分尽量在蜡块中部。胸腹水，为防止凝固可使用EDTA抗凝管，采集后混匀，避免污染；也可留取新鲜组织，等病理结果确认后再检测。标本要避免溶血、严重脂血及交叉污染。

2) 标本保存及运输：采集后立即送检（<2h），如不能立即送检2～8℃存放<48 h。避免污染及核酸降解。

3) 注意事项：如应用ARMs方法仅能检测出试剂盒列出的KRAS已知突变，无法检测未知突变。一次核酸扩增结果野生型，并不能完全排除突变，标本可能存在其他未知突变，也可能由于样品核酸质量、肿瘤异质性等原因造成；不合理的样本采集、转运及处理、样本中肿瘤细胞DNA量过低或者片段化严重均可导致假阴性结果；检测的靶序列区域出现变异或者其他原因导致的序列改变可能会导致假阴性结果；未经验证的其他干扰因素或者扩增抑制因素也可能导致假阴性结果。同时要注意防止污染造成的假阳性结果。

4）干扰因素：有可能抑制核酸扩增的物质，如肝素，严重溶血、酸性福尔马林等。

实时荧光PCR（AMRs），一代测序，二代测序等。