EML-ALK融合基因检测（EML-ALK） EML-ALK fusion gene detection

（1）参考区间：野生型。

（2）可报告区间为：野生型/突变型。

EML4（棘皮动物微管结合蛋白样4）基因与ALK（间变性淋巴瘤激酶）基因的融合。EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染色体的p21和p23带，相隔约10Mb距离。这两个基因片段的倒位融合能够使得组织表达新的融合蛋白，不同的EML4-ALK融合突变体均具有恶性转化和致瘤性能力。

EML4-ALK融合突变是非小细胞肺癌中多见的融合类型，多存在于非（轻度）吸烟肺癌患者中。EML4-ALK融合导致编码跨膜酪氨酸激酶受体的ALK基因持续表达，从而激活ALK酪氨酸激酶区及下游PI3K/AKT及MAPK等信号通路，进而引起肺癌的发生。多项大型回顾性研究显示，EML4-ALK的发生率为3～5%。ALK激酶抑制剂通过竞争性结合于ALK激酶区域，阻断了ALK下游的信号转导通路，从而达到治疗效果。多项临床研究指出，具有EML4-ALK的患者能从ALK激酶抑制剂的治疗中获益。

严格按照临床核酸扩增实验室的要求进行实验室管理。由于PCR方法敏感，要避免扩增前标本之间的交叉污染，也要避免扩增后产物的污染；同时要防止标本选择不当、采样错误、核酸的降解、丢失，扩增抑制物存在等因素对实验的影响。

1) 标本采集：可使用经病理确诊后的癌组织的石蜡切片，同时送检HE染色切片。取样组织中应确定含有30%以上的肿瘤病变细胞，所取部分尽量在蜡块中部。胸腹水，为防止凝固可使用EDTA抗凝管，采集后混匀，避免污染；也可留取新鲜组织，等病理结果确认后再检测。标本要避免溶血、严重脂血及交叉污染。

2) 标本保存及运输：采集后立即送检（<2h），如不能立即送检2～8℃存放<48 h。避免污染及核酸降解。

3) 注意事项：一次核酸扩增结果野生型，并不能完全排除突变，标本可能存在其他未知突变，也可能由于样品核酸质量、肿瘤异质性等原因造成；不合理的样本采集、转运及处理、样本中肿瘤细胞核酸量过低或者片段化严重均可导致假阴性结果；检测的靶序列区域出现变异或者其他原因导致的序列改变可能会导致假阴性结果；未经验证的其他干扰因素或者扩增抑制因素也可能导致假阴性结果。同时要注意防止污染造成的假阳性结果。

4) 干扰因素：有可能抑制核酸扩增的物质，如肝素，严重溶血、酸性福尔马林等。

实时荧光PCR，反转录PCR，荧光原位杂交，一代测序，二代测序等。