免疫固定电泳

1、免疫固定电泳(immuno fixation electrophoresis，IFE) IFE是一种定性方法，其灵敏度比IEP高50倍。此法亦用于证实单克隆免疫球蛋白的存在以及分类和定型。特别是在血清中检测出少量单克隆免疫球蛋白时尤为适用，如骨髓瘤的轻链型、IgD、IgE型、淀粉样变性、单体浆细胞瘤和骨髓移植后复发的诊断等。此外，IFE还可用于单克隆、双克隆和寡克隆γ球蛋白病的鉴别诊断。

2、结果判定:多克隆合成的免疫球蛋白经染色后沉淀呈弥散形态。具体判定如下:用一种或几种重链和轻链的抗血清可检出多克隆γ球蛋白病的弥散形的沉淀增高;单克隆免疫球蛋白可在多克隆免疫球蛋白沉淀区域内出现一条狭而深的染色带。IgG、IgA或IgM等的Ig及其相关的重链抗血清和两种轻链中的一种抗血清在同一水平上形成一条带;轻链蛋白血症用两种轻链抗血清之一时是以窄形带沉淀为特征，采用重链抗血清之一时所见重链γ球蛋白病，见有一浓集、均匀的染色区，然而当使用抗轻链血清时就不发生相当的反应;单克隆γ球蛋白病可出现至少三种窄形带。用重链或轻链抗血清能见重链和两种轻链沉淀区一条分立带或出现几条带。尿中排出单克隆免疫球蛋白是在抗重链和两种轻链的一种抗血清沉淀反应区，出现狭窄而浓集的沉淀带为特征。有多克隆、单克隆免疫球蛋白排出时，用几种抗重链中的一种血清和两种抗轻链血清的沉淀区出现弥散形沉淀带。多克隆轻链的排出，在使用抗内侧和外围抗原决定簇的κ和k型轻链血清沉淀后，可见弥散形条带。

为了防止出现不正确的解释，应当注意如下几点:在IgD及IgE抗血清的沉淀区见有一条可能为游离轻链时，必须进一步检测，以免漏诊IgD和IgE骨髓瘤;必须注意双重单克隆免疫球蛋白，因可被前带现象掩盖而不生成沉淀，在抗原高度过量时在沉淀带中央不显免疫沉淀反应，即最高抗原浓度区。为避免前带现象发生，必须将样本稀释成不同浓度重复测定;若病人血清中免疫复合物停留在加样位置，并出现窄带沉淀，可用两种抗轻链血清鉴别是否为外来物质;单克隆免疫球蛋白可发生不同形式和程度的聚合，如IgA单体、IgA二聚体、折叠形IgA二聚体，它们与血清蛋白复合以及自身的聚集而形成。在此情况下，将血清加入0.5%~1%疏基乙醇加温30min以后再测。

IFE的原理类似免疫电泳，血清蛋白质在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，固定剂和各型免疫球蛋白及轻链抗血清加于凝胶表面的泳道上，经孵育让固定剂和抗血清在凝胶内渗透并扩散，抗原抗体直接发生沉淀反应，若有对应的抗原存在，则在适当位置形成抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考泳道和抗原抗体沉淀区带被氨基黑着色，根据电泳移动距离分离出单克隆组分，可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。分析灵敏度为20～30mg/L。