1. 仪器构成　

LighCycler® 480 荧光定量PCR系统主要由光源、温控单元、光学元件、检测器和数据处理系统等组成。采用宽光谱、高强度的最新一代白光LED 作为光源；温控单元由Peltier 加热模块(96 孔和384 孔模块灵活互换)、样本位和热盖组成，模块使用导热性能高于铝质材质一倍以上的银质材质，同时在加热模块和冷却元件之间引入专利技术Therma-BaseTM气液对流平衡层，确保精确可靠的热循环过程；荧光检测部分包括滤光片、冷CCD 成像系统等。数据处理系统包括数据采集和系统分析软件，主要负责采集数据，形成实时图形，并进行数据处理和图形分析，得到目标DNA片段的含量和其他检测报告信息等。

2. 工作原理　

LighCycler ® 480 荧光定量PCR系统是一款六通道多色检测平台，采用宽光谱、高强度、寿命长的最新一代白光LED 作为光源，白光LED 通过六色光源滤光片后激发96 个或384个分析样品。激发后的荧光再通过六色荧光滤光片到达冷CCD 成像系统检测信号。热循环系统采用Peltier 半导体控温的同时，通过银质材质模块和专利技术Therma-BaseTM 气液对流平衡层，双重确保精确可靠的热循环过程。

3. 技术指标(表17-19)

4. 应用概述　

实时荧光定量PCR 技术是进行生命科学研究最常用的技术之一，它不仅可以对一些病原微生物的拷贝数进行精确的检测，而且还可以代替传统的Northern blot方法，对基因表达水平的变化进行检测，相对于传统的Northern blot方法，它不仅具有通量高、易于操作的优点，而且灵敏度高、易于标准化。此外荧光定量PCR 技术还可以很方便地对基因已知和未知突变进行扫描和检测。LighCycler ® 480 荧光定量PCR 仪可用于医疗、新药研发、诊断检验试剂研发等满足各个领域的应用需求。

(1) 病原体检测：目前，采用荧光定量PCR 检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB 病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。

(2) 遗传疾病的诊断：遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的疾病，其根本变化在于遗传物质。其类型包括单基因遗传病、染色体遗传病及多基因遗传病。遗传病诊断除询问病史，一般物理诊断，普通实验室检查及了解症状、体征外有特殊性。过去常应用系谱分析，染色体及性染色质检验作为遗传病诊断的主要依据，再辅以相关的酶学分析从而作出诊断。随着分子生物学的迅速发展及其在遗传性疾病诊断中的广泛应用，基因诊断技术为遗传病的临床诊断起了很大的促进作用。PCR 技术是基因诊断主要技术之一。这种快速、灵敏的基因体外扩增技术与多种分子生物学手段相配合可以检出大部分已知的基因突变、基因缺失、染色体错位等，PCR 技术日益成为遗传病诊断最有效、最可靠的方法之一。

(3) 疾病机制的研究：一些疾病的发病机制很复杂，涉及很多先天的遗传因素和后天的环境因素。如果比较病人和正常人的基因表达和蛋白表达的情况，有可能找到一些疾病的发病机制。而比较病人和正常人在基因表达水平的差异，荧光定量PCR 技术则是最有效也是最快速的方法。

(4) 药物疗效研究：对于一些已经上市的新药或是应用了很长时间的老药，其用药的效果及用药量和用药时间都可以进行进一步的研究，为更加合理地应用这些药物进行进一步的研究。以前所用的方法由于不能准确定量，灵敏度也不够，因此有很多需要研究的内容没有完成。而实时荧光定量PCR 技术则可以解决这一问题。大大地推动个性化诊疗的进程。

(5) 遗传疾病基因的定位：以前常用的分子标记有AFLP、SSR、RFLP 等，但是这些分子标记都有很大的限制，而且用于基因定位的时候往往不够精细。现在最常用的第三代分子标记是SNP，它在生物体内分布很广，所以能够比较精细地定位基因，这样就会方便以后的工作。

(6) 表观遗传学研究：现在很多医学研究表明，很多疾病的发病机制并不是由于基因组水平的改变，而是一些基因组水平的修饰所引起的，这就是表观遗传学。表观遗传学主要研究基因的甲基化和组蛋白修饰等方面的内容，而应用荧光定量PCR 技术可以对基因的甲基化进行定性和定量研究。

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