原理　

人外周血样本与该四色试剂避光孵育反应，荧光素偶联抗体与白细胞表面特异性抗原结合，采用溶血/ 免洗的方式处理反应样本，最后将处理后的样本在流式细胞仪上进行检测。由于不同类型细胞结合不同种类和数量的荧光素，该样本液通过流动室时，在激光照射下会被激发出不同发射波长的荧光，流式细胞仪对细胞的前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC) 和荧光信号进行收集，根据样本细胞检测的前向角散射光、侧向角散射光和荧光强度等参数信息，对淋巴细胞中T 淋巴细胞(CD3+) 亚群、B 淋巴细胞(CD3-CD19+) 亚群和NK 细胞[CD3-(CD16+CD56)+] 亚群进行分类。

主要成分

CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC 四色试剂：CD3-FITC 抗体( 克隆：SK7)、CD16-PE 抗体( 克隆：CB16)、CD56-PE抗体( 克隆：HCD56)、CD45-PerCP 抗体( 克隆：2D1)、CD19-APC 抗体( 克隆：SJ25C1)、磷酸盐、蛋白保护剂、防腐剂和稳定剂。

标本类型　

 EDTA 抗凝人外周血。

性能指标

（1）线性范围：在BriCyte E6 流式细胞仪上使用CD3-FITC/ CD16+56-PE/ CD45-PerCP/ CD19-APC 四色试剂( 流式细胞法) 和CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC 四色试剂( 流式细胞法)评估线性范围，该试剂的线性范围是在淋巴细胞浓度处于25×103/μl ～ 23.52×103/μl 评价出来的，结果在各细胞亚群规定范围内呈现线性相关，详见表2-7。

（2）精密度： 使用同一试剂对质控品(StatusFlow® Flow Cytometry Control，R&DSystems，Inc) 进行重复染色10 次，制备好的样本在BriCyte E6 流式细胞仪上检测，得到批内精密度，详见表2-8。

使用三个批次的试剂分别对质控品(StatusFlow®Flow Cytometry Control，R&DSystems，Inc) 各重复染色三次，制备好的样本在BriCyte E6 流式细胞仪上进行检测，得到批间精密度，详见表2-9。

使用同一批次试剂对质控品(StatusFlow®Flow Cytometry Control，R&D Systems，Inc) 进行染色，每天做2 批试验，批间间隔不少于2h，每批对样本做双份染色，共做20 天试验，一共有80个，(40 对）结果。参照EP5-A2 的计算方法求取批内精密度、批间精密度、日间精密度和总精密度，结果详见表2-10。

（3）准确度：将使用CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC 四色试剂( 流式细胞法)和CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC 四色试剂( 流式细胞法) 得到的淋巴细胞亚群的百分比与参比试剂所得到的结果进行比较。样本来自随机抽取北京市一家医疗机构的健康人和患者的静脉血，使用BriCyte E6 流式细胞仪进行评估，结果详见表2-11。

参考区间　

CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC 四色试剂( 流式细胞法) 和CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC 四色试剂( 流式细胞法) 对应的正常参考值( 区间) 经过大量实验获得。来自北京市(18 ～ 65 岁) 的健康人，其中男性114 例，女性96 例的血液样，结果见表2-12。

试剂的参考值( 区间) 受被检测者性别、年龄及样本制备技术的影响，此外，种族和抗原决定基表达的个体差异也可以影响参考值( 区间)，但是并没有足够的数据来建立此模型。正常参考区间的决定建立在性别、年龄、临床表现和种族的情况都应了解的前提下，且参考区间仅仅是作为一种信息提供的，因此由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值( 区间)。

染色稳定性　

建议在静脉血样本离体后48h内进行染色，染色后24h 内上机检测。

干扰因素　

禁止使用固定保存的患者样本。在染色前冷冻的血液样本会产生错误的结果。如果样本取自使用免疫抑制剂的患者，其结果分辨率较差。未成熟细胞会干扰试验结果。

 储运条件

(1) 试剂应在2 ～ 8℃环境下避光保存，未开瓶时有效期为18 个月，开瓶后有效期为90 天；禁止使用已过有效期的试剂。

(2) 试剂使用冰袋低温运输，并保证试剂包装在长途运输中不受损坏，不泄漏；在存储或者与细胞孵育过程中，禁止冷冻试剂，避免光线的直接曝晒，保持试剂瓶的干燥。

(3) 如试剂颜色加深、试剂变浑浊或出现沉淀等，则提示试剂失效，不可继续使用。

适用机型　

BriCyte E6、FACSCanto Ⅱ、FA CSCalibur。

规格与包装

可做检验项目列表

产品注册证书

产品说明书

市场评估报告