1.原理　

该检测是建立在特异性单克隆抗体与白细胞表面表达的抗原决定簇的结合能力的基础上。实验时将样本与本试剂一起孵育，以对白细胞进行特异性染色。然后，通过裂解除去红细胞，白细胞在该步骤不受影响且可通过流式细胞术进行分析。 流式细胞仪将分析细胞的光散射和荧光情况，使重要细胞群能够定位在流式图定义的门内，从而使光的侧向散射(SS) 与前向散射(FS) 具有相关性。在荧光通道上，可使两种不同参数组成散点图，这由用户自行选择决定。试剂盒中除了有抗HLA-B27单克隆抗体，还有抗HLA-B7单克隆抗体，用来排除因B7 交叉反应造成的假阳性结果。

2.主要成分　

详见表2-16。

非抗体成分： 缓冲液，PBS(pH 7.2) 加上2mg/ml BSA 和 0.1% NaN3。

3.标本类型　

EDTA 抗凝外周全血。

4.性能指标

(1) 特异性：HLA-ABC-M3 单克隆抗体对HLA-B27 抗原的特异性见Trapani 等的文献研究；BB7.1 单克隆抗体对HLA-B7 抗原的特异性见Brodsky 等的文献研究。

(2) 线性：当一特定个体中100% 的细胞为HLA-B27+ 或100% 为HLA-B27- 时，染色的线性检验不具有生物学意义。另外，在HLA-B27-B7-供体种，这样的试剂所必须显示的淋巴细胞的平均荧光密度(mean flouresence indensity，MFI) 对于HLA-B27 具有特异性。相对于HLA-B7 的特异性也是如此，但其MFI 值比在HLA-B27+B7+ 供体中获得的值低很多。这可由表2-17 中显示的来自HLA-B27+B7+(MFI+) 供体和HLA-B27-B7-(MFI-)供体的12 个MFI 测定值的均值算得的MFI+/MFI-的比值反映出来。

(3) 实验室内重复性： 由于供试对象在HLA-B27 特异性群组的分配是基于测定每个所分析淋巴细胞的荧光密度而不是基于染色淋巴细胞的百分率，所以实验室内重复性的研究将基于该群体的MFI。

在同一天用相同的流式细胞仪，对同一阳性靶细胞(HLA-B27+B7+ 淋巴细胞) 进行了12 次测定，得到MFI 结果总结见表2-18。

（4）实验室间重复性：两个不同的流式细胞仪分析制备物，得到MFI 的结果见表2-19 和表2-20。

5.结果演示　

患者外周血标本，用B27/B7双色试剂盒在FC500 流式细胞以上进行检测，如图2-3 和图2-4 所示，数据用Kaluza 软件进行分析。

图2-3 　B27/B7 双色试剂同型对照检测直方图

图2-4 　B27/B7 双色试剂阳性标本检测直方图

6.判断标准　

以HLA-B27 单阳性群体≥ 90%为阳性。

7.干扰因素

(1) 识别HLA-B27 抗原的HLA-ABC-M3单克隆抗体，可与HLA-B7 抗原发生交叉反应；并在较小程度上与CREG HLA-B7 抗原发生交叉反应。

(2) 识别HLA-B7 抗原的BB7.1 单克隆抗体可与HLA-B42 抗原HLA-B42 发生交叉反应。

(3) 本试剂检测某些样本表现出HLA-B27 阳性和HLA-B7 阳性的双重阳性结果；

1)HLA-B27/HLA-B7 基因型的杂合体表达；

2)HLA-B7/HLA-BY 基因型的杂合体表达；

3)HLA-B7/HLA-B7 基因型的纯合体表达。

因此，必须用微量淋巴细胞毒性实验或PCR对其进行验证。

8.储运条件

在打开小瓶前后，标记液体都必须避光保存在2 ～ 8℃下。

FC 500、Navious、 FACSCalibur、FACSCanto Ⅱ、FACSCanto。

规格与包装

可做检验项目列表

产品注册证书

产品说明书

市场评估报告