1.原理　

人外周血样本与该四色试剂避光孵育反应，荧光素偶联抗体与白细胞表面特异性抗原结合，采用溶血/ 免洗的方式处理反应样本，最后将处理后的样本在流式细胞仪上进行检测。淋巴细胞呈现CD45 强阳性和SSC 弱表达，因此在CD45/SSC 散点图中，可根据淋巴细胞的特点来准确圈选淋巴细胞，排除单核细胞、碎片等的影响。再通过特异的荧光抗体标记，得到CD3+T 细胞群、CD3+CD4+ 双阳性的辅助/ 诱导性T 细胞、CD3+CD8+ 双阳性的杀伤/ 抑制性T 细胞、CD3-CD19+B 细胞和CD3-CD56+ 的NK 细胞。

2.主要成分

tetraCHROME CD45/CD4/CD8/CD3试剂盒，详见表2-1。

非抗体成分：每瓶含有0.2% BSA、0.01mol/L磷酸钾、0.15 mol/L NaCl、0.1% NaN3 和稳定剂。

3.标本类型　

抗凝全血。

4.性能指标

(1) 线性范围： 用浓缩的淋巴细胞质控品(COULTER CYTO-TROL Control Cells) 进行连续8 次稀释，每次稀释后都进行3 次重复分析，以获得一系列CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD19⁺ 和CD3^-CD56⁺ 淋巴细胞浓度。样本使用CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 或CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 单克隆抗体进行染色，并使用Cytomics FC500 等流式细胞仪进行检测分析。

1)CD3⁺ 淋巴细胞，线性r2=0.9978。

2)CD3⁺CD4⁺ 淋巴细胞，线性r2=0.9978。

3)CD3⁺CD8⁺ 淋巴细胞，线性r2=0.9978。

4)CD19⁺ 淋巴细胞，线性r2=0.9977。

5)CD3-CD56⁺ 淋巴细胞，线性r2=0.9977。

（2）不精密度：使用CYTO-STAT tetraCHRO MECD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 和CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 试剂对全血细胞质控品(IMMUNO-TROL) 和全血细胞质控品低值(IMMUNO-TROL Low Cells) 进行染色， 一式两份，在两个不同的地理位置操作，每天检测两次， 共20 天， 来评估CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD19⁺ 和CD3^-CD56⁺ 细胞亚群阳性比例及绝对计数值，详见表2-3。

(3) 准确度：使用包含不同浓度的全血样本，采用Cytomics FC500 等流式细胞仪进行检测分析。对CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 和CYTO-STAT tetraCHROMECD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 单克隆试剂与TetraONE SYSTEM 结果一致性进行比较研究。对CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、CD19⁺和CD3^-CD56⁺ 细胞亚群百分比结果进行回归分析：

1) CD3⁺ 淋巴细胞，相关性r2=0.9829。

2) CD3⁺CD4⁺ 淋巴细胞，相关性r2=0.997。

3) CD3⁺CD8⁺ 淋巴细胞，相关性r2=0.9957。

4) CD19⁺ 淋巴细胞，相关性r2=0.987。

5) CD3-CD56⁺ 淋巴细胞，相关性r2=0.9763。

5.结果演示　

Immuno Trol 质控血，用上述方案在Navios 流式细胞仪上进行检测，结果如图2-1所示，数据使用Kaluza 分析软件分析。

图2-1 　流式细胞仪检测淋巴细胞亚群示意图

6.参考区间　

血样采集人群应来自不同的地区，其中应包括来自美国东部和加拿大东部、根据种族或年龄(n=24) 随机选取的个体。该值由流式细胞仪(EPICS XL-MCL 或Cytomics FC 500 流式细胞仪，对淋巴细胞设门) 确定，表示CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+ 细胞的总数，详见表2-4。每个样本可获得一个白细胞计数和五部分微分。绝对计数可通过Flow-Count( 直接) 方式确定。所得值表示为淋巴细胞总数的百分数(%) 及绝对计数( 个细胞/μl)。这些值仅用作典型值。每个实验室都必须依据当地正常人群的血样建立自己的预期值。

7.干扰因素

(1) 如果在2h 内进行流式细胞仪分析，制备的样本可避光保存在室温下；否则，样本要在2 ～ 8℃温度下加盖保存在暗处。所保存的样本需在样本制备后24h 内分析。

(2) 对于使用Flow Count( 单平台技术) 方法的绝对计数，必须在加入Flow Count 荧光微球后2h 内分析样本。

(3) 对于采用双平台方法的绝对计数，必须按照相应血液学分析仪器标签上的指示完成血液学分析，确保符合规定的样本年龄和操作限制。

(4) 为了得到最佳结果，要及时分析染色的细胞。

(5) 这些试剂不可稀释、分装或冷冻，仅限原包装使用。

(6) 这些试剂仅限用于流式细胞仪。

(7) 细胞暴露于溶解试剂时间过长，可能使白细胞遭受破坏，减少要研究细胞的数量。

(8) 以下情况下可能造成全部红细胞不溶解：有核红细胞、异常蛋白质浓度或血红蛋白病。未被溶解的红细胞会被作为白细胞计数，从而造成结果降低的假象。

(9) 健康状态异常并不总是表现出某些白细胞群体的异常百分比，患病个体可能显示出与常人相同的白细胞百分比，因此对于检测结果，应与临床及其他诊断数据配合考虑。

(10) 某些患者因其某些细胞的数量发生了变化或者非常低，可能会出现特殊的问题。

(11) 如果激光调准或选用的设置不当，用流式细胞仪获得的结果可能有误。

(12) 由于测定绝对淋巴细胞计数的不同实验室方法之间存在着不可接受的差异，因此必须评估所用方法的准确性。

8.储运条件　

未打开的试剂在2 ～ 8℃下储存。打开的试剂在2 ～ 8℃下储存时，使用完之后，请立即将试剂重新置于2 ～ 8℃下。不可冷冻。尽量避免光照。

9.适用机型　

FC 500、Navious、FACSCantoⅡ。

规格与包装

可做检验项目列表

产品注册证书

产品说明书

市场评估报告