文件名称：Procedure for determining packed cell volume by the microhematocrit method；Approved standard—Third edition[ 微量法血细胞比容测定程序；批准标准(第三版)]

发布日期：2000年

版本号：A3

适用范围：本文描述了通过离心法进行血细胞比容 (Hct) 测定的方法。适用于仪器法Hct测定全血的校准，可以作为仪器法和其他Hct 测定方法评估的依据，也适用于临床患者标本的检测，尤其是某些存在冷球蛋白的标本的 Hct 测定。

主要内容：H07-A3文件发布于2000 年，介绍了一种直接测定Hct 的标准方法。该方法可用于临床实验室和Hct 测定仪器生产厂家作为参考方法使用，是血液分析仪检测程序方法校准的标准，也是仪器法和其他Hct测定方法评估的依据。同样也可用于临床患者标本的Hct 测定，如患者治疗反应的监测。

本文件对检测程序中使用的器材的性能指标提出了详细的要求，包括对离心机和读数设备的校准、校准确认的信息。还对结果的表达，一般可接受的参考值，可能的误差来源进行了介绍。本方法的优点是仪器设备相对较为简单，精密度良好。微量离心法具有检测时间短、需要的标本量小、血浆分离效果好等优点，但应避免玻璃管断裂、管口密封不充分等意外的发生。

 仪器设备的要求：一次性毛细玻璃管，材 质为钠钙硅酸盐，长度75mm±0.5mm，内径 1.155mm±0.085mm；管壁厚度0.18～0.23mm， 推荐0.2mm；毛细管要直，内径变化不能超过内径的2%。离心机的要求：使用专用的微量比容离心机，半径大于8cm，能在30s 内达到最大离心速度，RCF能维持10 000~15000g，离心时间至少为5min，配有经校准过的自动计时器，最大刻度不小于5，且每隔30s都标有刻度。

读数装置：①选用一台带有台式游标卡尺的光学显微镜，要求配有4×或 10×物镜以及带十字标示的目镜，测量结果可以准确到0.1mm。当 Hct测定用于血液分析仪校准时，必须使用该方法； ②使用游标卡尺和放大镜进行读数；③其他特殊的读数装置；无论使用何种方法，读数结果重复性必须能够达到 ±0.0025，分辨率应能达到 0.005.

标本的采集与检测步骤：①标本采集：EDTA抗凝新鲜血标本，采集后室温放置6h内进行测定； 推荐使用EDTA-K2 作为抗凝剂，尤其是检测结果 用于血液分析仪校准时。EDTA-K3结果与之相比会低2%。②将标本颠倒8 次，使其充分混匀。 ③取两根长75mm的毛细管，各充入血液至管长的 2/3～3/4 处，每根毛细管大约需要50μl 血。 ④用柔软且有吸水性的材料擦净管外壁，水平倾斜毛细管，使吸入血柱的下端与毛细管口的距离至少为 5mm。⑤将毛细管垂直插入专用的密封剂里， 轻轻旋转毛细管，从密封剂中取出。插入毛细管中封口剂的长度不少于 4mm，仔细观察封口，确保封口平整，且与毛细管长轴垂直。⑥将封口的毛细管放入离心机，封口端朝向离心机转子的边缘。在毛细管对面，放置另一根毛细管，记录位置编号。 拧紧转头的盖子。⑦在RCF10000 ～ 15000g 条件下离心5min。⑧在离心机自动停止后，从离心机中取出毛细管，读数前垂直放置，应在60min 内读取结果。⑨于显微镜下观察每根毛细管，确定界面位置用于计算红细胞比容结果。⑩ 先将毛细管固定在固定架上，再将毛细管固定架置于载物台上。在视野里，确保架子和毛细管呈水平摆放，通过水平移动载物台进行观察。 在低倍镜下观察每一支毛细管，用游标卡尺标注下列界面读数： 红细胞/黏土；红细胞/白细胞；血浆/空气。 通过界面读数来计算血细胞比容。

误差来源：①标本来源；②毛细管；③读数误差。

相关内容可以参考《卫生行业标准 WS/T 3422011血细胞比容测定参考方法》。