文件名称：Reference leukocyte(WBC)differential count(proportional)and evaluation of instrumental methods；Approved standard—Second edition[白细胞分类计数(百分比) 参考方法和仪器法的评估； 批准标准(第二版)]

发布日期：2007年

版本号：A2

适用范围：本文件描述了白细胞分类计数参考方法仅适用于正常标本的检测，正常的白细胞类型包括中性粒细胞 (杆状核或分叶核)、淋巴细胞 (正常或变异淋巴细胞)、单核细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞。如果无法鉴别，仪器将给出异常细胞、可以未分类、有核红细胞等报警提示。

主要内容：本文件发布于2007年，为评价全自动或半自动血液分析仪白细胞分类计数的可靠性提供了详细的方法和要求。该方法为使用手工显微镜法在血涂片上进行白细胞分类计数的方法，是仪器法白细胞分类计数的参考方法，使用的标本为健康人血标本，不涉及异常标本的检查。

本文件还给出了统计方法，判断定性和定量检测方法性能。 该方法较为耗时费力，完全按照文件所述进行操作实验室很难用于常规标本的检测。仪器生产厂家可以使用本文件建立其白细胞分类的性能指标。本文件中描述的其他一些信息对常规血细胞分析也十分有用，不管是为了得到准确的白细胞分类计数结果还是作为质量控制的一部分，如制备和评估良好血涂片的方法。

血涂片制备的要求：使用EDTA 抗凝新鲜血，在采集4h 内至少制备3 张血涂片。使用楔形技术制备血涂片，即玻片近一端1/3 处滴一滴充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以 30°～ 45°角使血滴沿推片迅速散开，快速平稳地推动推片至玻片的另一端。室温放置自然晾干，在1h内使用Romanowsky 类染液染色，或使用无水甲醇固定后再染色。合格的血涂片应满足：①边缘整齐；②厚薄适宜；③头体尾分明；④两端和两侧留有空隙。

血涂片的检查步骤：①低倍镜下浏览全片，观察细胞分布是否均匀和有无异常细胞；在100×下观察细胞胞浆内颗粒和细胞核分叶情况。②选择中性粒细胞、单核和淋巴细胞分布均匀的区域作为计数区。破碎细胞和不能识别细胞的数量不应超过2%。③采用“城垛式”方法进行细胞计数。每张图片计数200 个白细胞；④同时计数所有的有红核细胞，结果以x个/100个白细胞表示。

检测人员的要求：①经验；②态度；③能力考核；能力考核的方法和要求等。

相关内容可以参考《卫生行业标准 WS/T 2462005 白细胞分类计数参考方法》。