文件名称：Enumeration of immunologically defined cell populations by flow cytometry；Approved guideline— Second edition[流式细胞术法免疫细胞分群计数；批准指南 (第二版)]

发布日期：2007年5月

版本号：A2

适用范围：本文件为淋巴细胞亚群的识别和计数建立性能指南，为使用免疫荧光流式细胞技术(FCM)来计数 CD34⁺造血干细胞提供指南。

目前关于淋巴细胞亚群检测结果的精密度、准确度和可比性还未达成统一标准，但CD34⁺ 造血干细胞计数达成了ISHAGE 指南，也是本文件介绍的基础技术，但不包括一般性能标准和参考区间的建立。因此，实验室应根据所用试剂和仪器建立自己的仪器性能指标和染色特性。

主要内容：本文件发布于2007年，介绍了使用FCM测定淋巴细胞亚群和CD34⁺ 造血干细胞的指南。起草工作组也注意到了其他那些已经存在或正处于研究中的所谓的非传统的方法学，如使用微量毛细管分配标本的系统、非荧光细胞检测法 (见附录C)。本文件中讨论的问题是任何 CD4⁺T 细胞计数都会遇到的通用问题，如标本的采集和转运、生物安全、结果报告与解释等。但是并未涉及非传统方法在标本准备、仪器校准和质量控制等方面存在的特殊问题。

主要内容包括三个主要部分。第一部分为通则，包括概述 (目标、质量控制程序、样本准备、 试剂、样本分析、数据分析和解释)；专业术语；安全性(标本采集、安全服、生物安全柜、标本容器、离心、吸管、锐器、废弃物处理和标本灭活、标本保存、不固定的标本、仪器消毒)；绝对细胞计数的方法 (简介和历史回顾、双平台方法、基于容量分析的单平台方法、验证SPT程序等)。 第二部分为淋巴细胞亚型计数，包括标本采集 (患者信息和标本标签、针刺取血技术、抗凝剂选择)； 标本运输 (标本处理和打包、保存的影响)；样本制备(外观检查、溶血分析、凝血、温度极限、 标本标签不合适、标本完整性、样本加工程序的选择)；免疫染色面板(淋巴细胞免疫表型的试剂、 染色方案优化)；样本质量控制程序；样本分析(仪器配置、验证可接受标本的可行性、验证代表性抽样)；数据分析(CD45门、淋巴细胞亚型分析)； 数据保存 (信息保存、数据保存类型)；数据报告和解释(工作表、监督抽查、数据显示的审查、 数据报告、包含参考区间在内的数据解释等)；参考区间。第三部分为CD34⁺ 造血干细胞和祖细胞计数，主要内容除了标本采集、运输和制备、质量控制和样本分析以外，还包括CD34和CD35表明抗原的免疫荧光染色、CD34⁺细胞的绝对计数等。