文件名称：Performance of single cell immune response assays；Approved guideline—Second edition[单细胞免疫反应测定性能；批准指南(第二版)]

发布日期：2013年11月

版本号：A2

适用范围：本文档为单细胞免疫应答方法的性能表现提供了指南，这类方法只要应用于临床范围内的感染性疾病 ( 尤其是HIV)、肿瘤、移植、自身免疫性疾病和过敏等。本指南重点是，CD4和CD8T细胞亚群在识别临床试验中需求日益增加的免疫能力标记物中的应答范围内的抗原特异性功能性方法，以及监管机构批准新的免疫疗法所用到的抗原特异性功能性方法。本文档涉及的方法包括，流式细胞仪测定抗原激活的胞内细胞因子的生成，主要组织相容性复合物的多聚体和流式细胞术定量分析抗原特异性CD4、CD8细胞， 酶联免疫斑点法定量测定抗原特异性细胞、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯染色细胞测定抗原诱导的淋巴细胞增殖时发生水平变化时的流式细胞仪的评估。此外，本文档还涵盖了试验流程和结果解释、 样本采集、转运、样本准备、质量控制、试验验证和故障排除。

指南为实验室提供了免疫疗法等临床科研应用的方法，同时为制药公司提交到监管机构前的新产品的实验室评估提供了指导。此外，对于学术机构在科研和协调仪器安装市开发的用于评估抗原特异性应答的方法，以及参加多中心/ 多国家临床试验的实验室间评估试验方法，本文档提供有价值的参考。总之，本文档为快速发展的单细胞免疫功能性试验方法建立了基本共识。

单细胞应答方法的临床应用尚未获得美国食品药品监督局批准。

本文档：临床诊断实验室不能照搬本文档使用，也不能将之视为流程操作手册。本文档未依照 CLSI 的 QMS02 文档编写，不能被临床诊断实验室用来编写临床实验室操作流程使用。 描述了试验的基本流程、包含在对于成功应用和结果解释都十分重要的四个步骤的每一步内的特殊组分，而对任何特异的刺激物和淋巴细胞亚群均未提供逐步的详细的细节内容。

未就应用于某类特殊患者人群的特殊应用进行描述。

主要内容：文章主要介绍了同时，文章还讲到了关于样本采集、转运和准备的基本问题，结果解释，以及质量保证和检测确证方法。免疫学已经从一门基础科学发展成为医学和实验室科学的主要推动力。新疫苗的开发、迅速推广的免疫疗法以及几乎渗透入所有医学学科中 的靶向免疫干预，催生出了新的需求，即研发出更优秀的实验室工具，以更好地用于检测抗原特异性免疫应答和监测免疫应答中不同干扰的疗效。这些复杂的方法通常在冷藏保存的细胞上进行，这使得不同实验室间的实验结果变异很大。这类方法的重要性日益被认识，临床应用逐渐增加，同时伴随着实验的复杂性和高的室间变异，这都需要出现方法标准化，才能使得该领域继续发展。正是在这种需求的迫切推动下，产生了本版指南。

我们希望通过本指南的努力，能使新的免疫干扰和临床实验、转化研究中的免疫治疗物质 ( 尤其是监管机构正在考察中的的评估更为高效。此外，指南中关于此类细胞免疫方法 ( 例如，T 细胞应答) 的性能部分，可提高实验性能和促进它们在常规患者监测中所发挥作用的临床评估。

目前关于评估细胞免疫应答的方法学数量众多。本文档重点介绍了细胞内细胞因子、主要组织相容性复合物的多聚体的定量分析、酶联免疫斑点技术 (ELISPOT) 和用于评估细胞增殖的羧基荧光素琥珀酰亚胺酯示踪染料染色方法。随着方法运用的进步和方法的改进，监测免疫应答的新方法将伴随着实验室新进展一并出现。届时，本指南也会编制新的版本以介绍领域新进展。

I/LA26第2版与第1版相比，进行了如下变动： 参考文献进行了重新编制，包括近期各种方法的新的应用方向的经验，临床实验的包含内容和方法优化。

(1) 流式细胞术：介绍了更加新且更加复杂的设门算法(例如，双黏体的去除，纳入和排除设门) 及新参数，以提高信噪比，提高检测偶然事件的敏感度和精确度；

(2) 包含了关于评估熟练度的新方法；

(3) 包括了改进优化后的ELISPOT 的特性和影响、故障排除的具体内容，以及常见问题的特征等。

根据疾控中心要求重编了样本处理指南部分；

增加了关于应用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯示踪染料染色方法评估细胞增殖的章节。

除了常见多聚体产品的新信息外，增加了关于五聚体和 Dextramers( 或等同物 ) 的新信息。

增加了用于分离外周血单个核细胞的细胞制备管的新信息。修改了细胞内细胞因子染色部分。

增加了新的可固定的死活细胞鉴定染料的信息，以及细胞内染色流程。增加了新的附录，用于描述偶发事件的统计学分析方法。

根据当前惯例修订了“术语”部分。