文件名称：Verification and validation of multiplex nucleic acid assays；Approved guideline—First edition[核酸多重检测的验证；批准指南(第一版)]

发布日期：2008年3月21日

版本号：A

适用范围：对于单一样品，多重检测会同时得到多重结果，例如，两个或两个以上的突变会在单个或多个基因上同时被检测到；如囊性纤维化跨膜传导调节因子的变异分析，一组德系犹太人中常见的基因突变位点，细胞色素P450 的基因分型，深静脉血栓及丙型肝炎病毒分型等。多重检测中如何进行合适的验证实验给实验室带来了重大挑战。各种技术和仪器平台可用于进行多重检测。需要注意的是，获得适当的生物对照品是非常困难甚至是不可能的。此外，相对于单一检测来说，多重检测增加了数据分析和报告结果的复杂性。

本指南为定性多重检测的分析验证提供了建议。多重检测是指在一个普通的样品制备，信号放大，等位基因歧视和共同解释过程中两个或两个以上的目标物被同时检测到。指南对目前可用技术进行了概述并为新的评估方法给出了建议， 总结了各种类型标准物质的设计、获得和合理使用方法，这些标准物质包括血液样本、剩余的患者样本、全基因组扩增产物、合成的寡核苷酸单体和质粒。当前的分析形式用来解释合适的多重检测验证方案、数据分析和结果报告。

本指南不包含个别目标物的测定和评价，对于基因分型和病原体检测/ 识别的定性多重检测的分析验证进行了有限的讨论。对于基因表达检测的深入讨论，会独立成章，不在此赘述；但本指南的许多方面可以应用到基因表达检测中，例如标本处理、样品制备、核酸分离、扩增和检测技术及仪器平台。该指南偏重于分析性能，对于临床性能只作一般讨论。对多重检测的某些特殊方面和考虑进行了简要总结，关于基本技术不作详细讨论，这将会出现在另一个分子生物学方法的指导原则中。

主要内容：多重检测可以实现对同一样品中多种分析物的检测并将其进行区分。商业化的和实验室开发的多重检测方法正在迅速增加，它们使用了各种技术和仪器平台。多重检测中如何进行合适的验证实验给实验室带来了重大挑战，特别是合适的标准物质的获得。相对于单一的结果分析，复杂的数据分析和结果报告正在增加。本指南说明了核酸多重检测中定性和半定量方法的分析学验证；但是不包括定量分析和表达分析的部分。涵盖的主题有样品制备、多重检测技术和方法的一般讨论、标准物质、分析验证和确认、数据处理和结果报告。对临床验证也作了简要介绍。考虑到多重检测的广度和多样性，将不涉及具体的验证方案，但是会根据最新的指导文件给出关于分析验证的详细建议。