作者：邹志平 唐宁

前言：APTT纠正试验作为当APTT延长时的初步鉴别试验，广泛应用于临床实验室，但始终存在未标准化、操作繁琐、结果判断对人员要求较高等问题，本期我们介绍一种通过血凝仪自动按比例混合标本、以图形判读结果的APTT纠正试验新方法，希望能推动该试验更为准确、易用。

目测法与Rosner指数在 APTT纠正试验结果判读上的比较

当凝血检查发现异常时，可以用混合纠正试验判断异常是由凝血因子低下/缺乏，还是由抑制剂（如狼疮抗凝物、凝血因子抑制物）引起的。

在日本，临床实验室会按不同比例混合患者血浆与正常血浆后检测APTT，把结果做成图表，从视觉上判断『上凸』或是『下凹』[1,2]。

此外，国际血栓与止血学会（ISTH-SSC）推荐检测患者血浆、正常血浆、两者的1：1混合血浆三点，使用结果的比值（Rosner index）来进行评价[3,4] 。

※Rosnerindex=(1:1混合血浆的APTT秒数-正常血浆的APTT秒数)/患者血浆的APTT秒数×100(%)

   Rosnerindex>15: 抑制剂型、<15：因子缺乏型

    积水医疗科技（中国）有限公司与华中科技大学同济医院检验科合作，收集狼疮抗凝物（LA）阳性标本、乏因子标本、VIII因子抑制物标本，用两种方法进行检测判读，比较两者的灵敏度、特异性和一致程度。LA阳性标本由DRVVT和SCT检测并确认，抑制物标本由改良Bethesda法确认。

实验流程：

1、标本：收集20例正常人标本制作正常混合血浆；已确认的狼疮抗凝物（LA）阳性标本、內源因子缺乏标本、VIII因子抑制物阳性标本各20例；

2、即时型纠正试验：日本积水CP2000血凝仪自动进行即时型混合纠正实验，无需人工配制。

3、延迟型纠正试验：需手工配制后温浴2h后再进行APTT检测，如下图所示。

4、绘制图形（下图举例为EXCEL绘制，仪器可自行绘制及判定）

模式一(狼疮抗凝物阳性患者标本)：

模式二（FVIII抑制物阳性患者标本）：

模式三（无抑制物的FVIII缺乏患者标本）：

仪器实例展示（日本积水CP2000血凝仪的升级款CP3000的软件界面）

PS：该图与上文EXCEL绘制图形为左右镜像。

5、图形判断

如上图所示：

• 即时型、延迟型都下凹提示因子缺乏的可能，可进一步进行内源性因子的定量检测；

• 即时型下凹或者成直线，而延迟型向上凸，提示存在凝血因子抑制剂的可能，关键是在混合比率50%时的秒数是否拉开差距；

• 即时型和延迟型都是直线或者都向上凸，标本曲线几乎平行移动，提示LA阳性可能

为了客观地评价结果，仪器还计算了面积比(AR)，上凸或者下凹的识别用百分比表示。当面积A(长方形画对角线后的下三角形)等于面积B(长方形画对角线后的上三角形)时，AR定义为100%。；当面积A大于面积B时，抑制剂类型定义为凸曲线型(即AR>105%)；缺乏类型定义为凹曲线型(即AR<95%)；可疑的抑制剂类型被定义为表现出近似的直线模式（95%<AR<105%）,不能被归类为凸曲线模式，这可能包括含有凝血抑制剂的样本。每种类型的分类都是基于AR值以及曲线表现的模式。

6、ROSNER INDEX计算

结果报告：

即时型ROSNER指数 >15.0  提示患者血浆存在抑制物可能；ROSNER指数 <15.0  提示患者血浆因子缺乏可能。

7、两种方法的比较

A、两种方法对于因子缺乏的灵敏度、特异度如下

B、两种方法对于抑制物（包括LA和因子抑制物）的灵敏度、特异度如下：

C、目测法可以很好的区分狼疮阳性和因子抑制物阳性标本，灵敏度如下：

讨论：

1、混合纠正实验可迅速提供有关APTT延长的可能原因的数据。而实验室工作人员的技能是促进混合纠正实验完成的关键因素，实验室自动化可以减少手工分析造成的技术差异。与手工分析相比，CP2000的优点在于它的自动混合研究功能可以减少不精密度。

2、CP2000型凝血分析仪基于其自动多稀释和模式识别功能，可以快速提供患者APTT延长可能原因的初步分析报告，结果判断直观方便，对人员要求不高，特别适用于不能随时进行因子抑制物、狼疮抗凝物等特殊检测的临床实验室。

3、CP2000的另一个优点是纠正试验所需样本体积更小。我们发现只需要125 uL病人血浆标本即可完成5点即时型混合纠正实验。

4、对于日本积水APTT试剂，以本实验室（同济医院检验科）既往1：1混合标本温浴1h后延长3秒判断时间依赖性抑制物并不适用。最大的影响因素可能是温浴时间的差别（本文为2h），其次是不同生厂商试剂成分的差异。因此未来可补充温浴1h的研究，可能进一步缩短报告周期。

5、以上ROSNER指数判断结果是以15.0为判定值，若ROSNER指数以11.0为判定值，在这62例小样本分析中ROSNER指数的灵敏度可提高至69%。

参考文献：

１）Miyakis S, et al: International consensusstatement on update of classification criteria for definite antiphospholipidsyndrome. J Thromb Haemost 4: 295-306, 2006.

２）家子正裕：ループスアンチコアグラント、スタンダード検査血液学　第2版　日本検査血液学会編, p170-171, 医歯薬出版,　東京, 2008.

３）Rosner E et al.; Thromb Haemost 57:144-7, 1987.

４）Pengo V et al.; J Thromb Haemost 7:1737-40, 2009.

利益冲突声明

作者：邹志平 积水医疗科技（中国）有限公司学术技术经理；作者唐宁没有需声明的利益冲突。

文章来源：血栓与止血实验室检查