作者:广东省广州市暨南大学附属第一医院临床检验中心 李倩
前些天在临检岗位轮转时,一个尿标本要求做本周氏蛋白定性试验。大家是怎么做的呢?
常规方法是热沉淀法,粗看尿液标本还算清晰,把尿标本倒进玻璃试管中,然后直接在酒精灯下烧,尿液开始逐渐浑浊,出现了很多絮状沉淀物,这是本周氏蛋白阳性吗?当然不是。
尿本周蛋白是诊断和监测多发性骨髓瘤的重要标志物,多发性骨髓瘤是骨髓内单一浆细胞株异常增生的一种恶性肿瘤,骨髓瘤细胞所合成的免疫球蛋白,其轻链与重链合成不平衡,因轻链产生过多,使游离轻链过剩。轻链能自由通过肾小球滤过膜,当浓度超过近曲小管的重吸收能力时,可从尿液中排出,即本周蛋白尿或轻链尿,轻链分为κ型和λ型。本周蛋白在pH4.9±0.1条件下,加热至40-60℃时可发生凝固,温度升至90-100℃时溶解,而温度减低至56℃左右,又可重新凝固,故本周蛋白又称为凝溶蛋白。
实验室本周蛋白定性试验最常用方法为热沉淀-溶解法,其是基于本周蛋白在40-60℃时凝固,90-100℃时溶解的特性。实验时应使用新鲜尿液标本,尿液浑浊时需要离心后取上清液检查。如果用直火加热,温度上升较快,在沉淀尚未显现时又由于温度急速上升而遭溶解,以致出现假阴性。而水浴加热时,温度缓慢上升,并在60℃保温5-10s,沉淀得以充分显示观察。加热到100℃,沉淀不能再溶解可能由于尿中同时有白蛋白和其他蛋白质所干扰。需先用加热乙酸法沉淀普通蛋白质,然后趁热过滤,取上清液检查。同时在检测中要控制尿液pH在4.5-5.5范围。但这种方法灵敏度低,假阳性率高,只适用于本周蛋白的初筛实验。
有小伙伴疑问,尿蛋白定量包括本周蛋白吗?
目前,我们医院检验科关于尿蛋白的检测项目有尿常规、尿蛋白定量、尿微量白蛋白测定。
尿常规中尿蛋白是试带法,根据pH指示剂蛋白误差原理,在pH3.2条件下,酸碱指示剂溴酚蓝产生的阴离子与带阳离子的蛋白质结合生成复合物,引起指示剂进一步电离。当超越缓冲范围时,指示剂发生颜色改变,颜色的深浅与蛋白质含量呈正比。试带法用于尿蛋白定性或半定量检测。试带法对白蛋白灵敏,对球蛋白的灵敏度几乎不反应,容易漏检本周蛋白。
尿蛋白定量是连苯三酚红法,连苯三酚红与钼酸结合形成红色复合物,此复合物在酸性条件下与蛋白结合形成蓝紫色复合物,在600nm处有最大吸收峰,吸光度大小与蛋白质含量成正比。该方法测定的是尿液中总蛋白的含量,对球蛋白、本周蛋白有较好敏感性。
尿微量白蛋白测定是用化学发光法,尿液中白蛋白与包被的单克隆鼠抗-人血清白蛋白反应,形成单克隆鼠抗-人血清白蛋白-尿液白蛋白复合物,再加入碱性磷酸酶标记的抗人血清白蛋白,形成单克隆鼠抗-人血清白蛋白-尿液白蛋白-抗人血清白蛋白-碱性磷酸酶复合物,再加入发光底物。发光强度与尿液中白蛋白含量成正比。此方法仅对白蛋白具有敏感性。
检测尿液本周蛋白最佳方法是免疫固定电泳法,可判断出轻链是κ型还是λ型或两者均存在。
来源:检验医学网
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