作者：张福勇 广西医科大学第一附属医院

【重要性】

凝血酶原激活以后，凝血酶将纤维蛋白原水解为纤维蛋白单体，此时在因子XIII和钙离子共同作用下，形成交联的纤维蛋白凝块，从而牢固止血！倘若缺乏因子XIII，普通实验室检查，包括凝血四项、血小板质和量等均正常，但可有术后出血，伤口迁延不愈等表现，甚至也可以有一些重要的脏器出血等危及生命的表现。此外还有一个特异性的出血表现，脐带出血，是高度怀疑因子XIII缺乏的。

【简易性】

这个试验对实验室的条件要求不高，甚至不需要自动化仪器，只需要：①促凝剂，例如钙离子或凝血酶，②溶解剂，例如5mol/L的尿素溶液（尿素30g，蒸馏水加至100ml）或1%的单氯醋酸（也有推荐2%的），外加水浴箱即可。

【结果解释】

关于因子XIII定性，至今只做过一例阳性，为纯合子的FXIII基因突变，其因子XIII定性活性＜1%。实际上，因子XIII活性＞5%，该试验几乎就不再能溶解纤维蛋白凝块，从而只有阴性结果，我因而一度对尿素溶解试验的价值持怀疑态度，从而对FXIII抗原的定量心向往之，但奈何成本太高和收费定价太低的原因……

后来，我似乎重新认识了该试验结果解释的临床意义。我在不同场合请教过瑞金医院王教授，他均告诉我因子XIII定性的尿素溶解试验已经基本够用了，犯不着非要做定量不可。直到我看到这么一句话，“筛选试验提示患者的血浆凝块在5M的尿素或1%单氯醋酸中溶解，表明因子XIII严重缺乏（＜1%-2%），这种筛选试验在临床上是有用的，因为通常仅在严重的缺乏时才表现出出血倾向。”我才终于明白王教授传达给我的信息所蕴含的深层涵义！

以下内容介绍因子XIII定性试验的常规操作，以及由该试验衍生的，半定量试验和因子XIII抗体的筛查试验。

因子XIII定性试验

【操作】

1.受检血浆0.1ml，加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，混合后置37℃水浴中10-15min，使凝块形成。（水浴箱取出时，需注意观察凝块形成，有时会延迟出现，必须确保有凝块再进行下一步。）

2.将凝块移入5mol/L的尿素或1%/2%的单氯醋酸中，置于37℃水浴中。（实际上，转移凝块的操作不太便捷，可以直接将溶液加入凝块中。）

3.先每5min观察一次，共2小时；以后2-4小时观察一次，共24小时。

4.阴性对照：受检血浆用正常血浆0.1ml，其余操作相同。

5.阳性对照：JTH有文献报道可考虑EDTA血浆+凝血酶，但凝血酶的浓度尚不统一。

【临床意义】

若纤维蛋白凝块在24小时内（尤其是2小时内）完全溶解，表面因子XIII有先天性或获得性缺乏，获得性见于肝病，SLE，类风关，淋巴瘤，转移性肝癌，恶性贫血，DIC及原发性纤溶等。（实际上，24小时放置，凝块大多都会变小，只要仍有凝块或纤维丝存在，均应为阴性。）

【应用拓展】

1.单醋酸定量试验

试剂

① 取单碘醋酸钠分别制成0.005,0.015,0.025，0.035 mol/L的水溶液。

② 0.05 mo/L氯化钙溶液。

③ 5 mol/L尿素溶液。

操作方法

① 取上述不同浓度的单碘醋酸钠溶液各0.1ml，加入受检血浆0.2ml中。

② 每管再各加入0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，于37℃水浴中待凝块形成。

③各管中分别加入5mol/L尿素3ml，开始计时。

④ 分别于30，45，60，90分钟时用力摇动，并观察结果。

⑤正常对照,方法相同。

结果

以“积分”为计算标准。

4分：溶液清晰,凝块完整,无溶解现象。

3分：溶液清晰,凝块呈部分溶解现象。

2分：溶液混浊，凝块大部分溶解或碎裂成块。

1分：混浊的溶液中有碎块微粒存在。

0分：溶液混浊，凝块完全溶解。

记录上述不同时间、不同浓度的单碘醋酸钠溶液试管中的分数，积其总分,即为单碘醋酸耐量试验的结果。

参考值

正常积分大于45分，若低于45分则为因子XIII缺乏。

临床意义

FXIII半定量。

2. 因子XIII抗体的纠正试验

【原理】

待检血浆与正常血浆以不同比例混合，再做溶解试验，如果存在因子XIII抗体，则加入正浆后的测定结果仍为异常。（可用于获得性因子XIII缺乏的诊断，即因子XIII抑制物，对于初步鉴别遗传性还是获得性的因子XIII缺乏，这个试验还是非常重要，毕竟因子XIII基因测序不是那么方便快捷和便宜。）

【操作方法】

见下表

立刻分别做因子XIII定性试验。此外将上述正常与待测血浆混合样本置37℃温育1小时后，离心取上清液，再重复做一次，可以提高试验准确性。

【结果判读】

第1管（待测血浆）异常，第2管恢复正常，多为因子XIII缺乏；若第3管检测结果仍异常，则多为因子XIII抗体存在。

【案例分析一】

知道真相的我，眼泪掉下来……

概要：男，11岁，儿科，发热伴腰痛、下肢无力1天，考虑：1.脊髓病变待查（血肿？），2.脑积水，3.尿潴留，4.血尿查因。实验室检查：血常规、凝血四项正常，肝肾功能基本正常。尿素溶解试验：30min完全溶解；13因子抑制物（纠正试验）：1：1正浆混合后24小时不溶解，考虑存在遗传性因子XIII缺乏。

处理：①因子XIII基因测序，一个碱基发生缺失，纯合突变；父母均为该突变的杂合子，其母亲是其父亲的表哥的女儿……②长期接受因子XIII替代治疗，例如每月输注冷沉淀等。

【案例分析二】

罕见而重要，查不到原因的出血不如试试尿素溶解试验吧……

概要：女，56岁，直肠癌术后间断便后出血6个月，术前凝血功能正常，多次处理后复发，出血特点：迟发性，进行性加重；大量使用血制品；转我院。凝血功能，Fg稍低，DD稍偏高，余正常。尿素试验：1min溶解；13因子抑制物（纠正试验）：1：1正浆混合后仍溶解，考虑存在因子XIII抑制物；诊断：获得性凝血因子XIII缺乏症。

处理：容易误诊，与体内免疫功能紊乱有关，如SLE，长期应用某些药物，如异烟肼、青霉素、普鲁卡因胺、环丙沙星等；治疗上，接受因子XIII替代治疗，清除抗体，提高因子XIII水平。

【参考文献】

1.尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2015.98.

2.王学锋,王鸿利.血栓与止血的检测及应用[M]. 上海:世界图书出版公司,2002.

3.Jennings,I., et al. (2003). "Problems relating to the laboratory diagnosis offactor XIII deficiency: a UK NEQAS study." J Thromb Haemost 1(12):2603-2608.

来源：凝血6因子